花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)作(zuo)(zuo)為花(hua)(hua)(hua)生(sheng)生(sheng)產過程中價值極低的(de)(de)(de)(de)副(fu)產物(wu)(wu)(wu)，除了(le)用于(yu)動物(wu)(wu)(wu)飼料外，大部分被當(dang)作(zuo)(zuo)廢(fei)棄(qi)物(wu)(wu)(wu)而造成(cheng)資源(yuan)浪費。近些年(nian)研究(jiu)發現，花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)中富(fu)含(han)多酚類物(wu)(wu)(wu)質(zhi)，具有(you)很高(gao)(gao)的(de)(de)(de)(de)營養(yang)和(he)利(li)用價值。花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)中多酚類物(wu)(wu)(wu)質(zhi)含(han)量為90~125mg/g，包括白藜蘆醇、原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)、酚酸等(deng)物(wu)(wu)(wu)質(zhi)，其中原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)占花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)總質(zhi)量的(de)(de)(de)(de)17%，約(yue)有(you)50%為生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活性較(jiao)(jiao)高(gao)(gao)的(de)(de)(de)(de)低聚(ju)(ju)(ju)體(ti)(ti)。原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)具有(you)較(jiao)(jiao)強的(de)(de)(de)(de)抗氧化能力(li)，可作(zuo)(zuo)為防(fang)癌、防(fang)治(zhi)心血管疾病(bing)藥物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)主要(yao)有(you)效成(cheng)分，可用作(zuo)(zuo)安全無毒的(de)(de)(de)(de)新型(xing)(xing)天然抗氧化劑。目(mu)前，市場上(shang)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)產品(pin)大部分是(shi)葡萄(tao)(tao)籽來(lai)源(yuan)的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)，葡萄(tao)(tao)籽中只(zhi)含(han)有(you)B型(xing)(xing)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)，其聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)度(du)(du)較(jiao)(jiao)高(gao)(gao)，平均聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)度(du)(du)可達(da)14.3。近年(nian)來(lai)研究(jiu)較(jiao)(jiao)多的(de)(de)(de)(de)花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)富(fu)含(han)A型(xing)(xing)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)，聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)度(du)(du)較(jiao)(jiao)低，平均聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)度(du)(du)為3.2。研究(jiu)發現只(zhi)有(you)低聚(ju)(ju)(ju)體(ti)(ti)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)(聚(ju)(ju)(ju)合(he)(he)度(du)(du)≤3)可以完全被胃腸道吸收，A型(xing)(xing)與B型(xing)(xing)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)在人體(ti)(ti)內(nei)發揮(hui)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)(zuo)用不(bu)同。鑒于(yu)花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)與葡萄(tao)(tao)籽來(lai)源(yuan)的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)不(bu)同，有(you)待(dai)于(yu)開發花(hua)(hua)(hua)生(sheng)紅(hong)衣(yi)(yi)來(lai)源(yuan)的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)(hua)(hua)青(qing)素(su)產品(pin)。
不同(tong)純度的原花青素在食品、保健(jian)品、藥品以(yi)及化(hua)妝品等(deng)領域有一定(ding)的應(ying)用(yong)，市場對其(qi)純度的需求也不同(tong)。目前(qian)分(fen)離(li)純化(hua)方法主要有溶劑(ji)萃(cui)取法、層析(xi)法、液相制(zhi)備(bei)(bei)色譜等(deng)，但(dan)大(da)(da)孔樹脂(zhi)(zhi)法應(ying)用(yong)最為(wei)廣泛，其(qi)設備(bei)(bei)簡單(dan)、操作方便、便于工業化(hua)生產。本(ben)文采用(yong)大(da)(da)孔吸附樹脂(zhi)(zhi)對花生紅衣原花青素進(jin)行分(fen)離(li)純化(hua)，并(bing)用(yong)HPLC-MS對純化(hua)產物進(jin)行分(fen)析(xi)鑒定(ding)。
花生紅衣原(yuan)花青(qing)素的提取
用(yong)小型(xing)高速(su)粉碎機將花生紅(hong)衣(yi)(yi)粉碎至過40目篩(shai)，每千克(ke)花生紅(hong)衣(yi)(yi)采用(yong)10L石油醚去除脂類物(wu)(wu)質，于(yu)30℃恒溫(wen)水浴(yu)鍋中脫脂5h，抽濾，濾渣置(zhi)于(yu)通風櫥中去除石油醚，保存在干燥器中備用(yong)。每千克(ke)脫脂花生紅(hong)衣(yi)(yi)采用(yong)10L體(ti)積分數為(wei)70%的乙醇溶液(ye)提取，在超(chao)聲功率120W、超(chao)聲溫(wen)度35℃的條(tiao)件下(xia)，超(chao)聲提取10min，相同條(tiao)件下(xia)提取3次。合(he)并過濾得(de)(de)到的濾液(ye)，旋轉(zhuan)蒸發至干，得(de)(de)到花生紅(hong)衣(yi)(yi)原花青素粗提物(wu)(wu)。
大孔吸附樹脂純化(hua)花生紅衣原花青素(su)
大孔吸附樹(shu)脂的預處(chu)理
大孔吸附樹(shu)脂常含有一些單體、分散劑(ji)和(he)致孔劑(ji)等，使用(yong)(yong)(yong)(yong)時需要除(chu)去(qu)這些有毒的有機(ji)殘留(liu)物，所以必須經過(guo)預處理(li)。預處理(li)方法：無(wu)水乙醇浸泡(pao)24h→用(yong)(yong)(yong)(yong)無(wu)水乙醇洗至流(liu)出(chu)液(ye)與水1∶5不渾濁(zhuo)→用(yong)(yong)(yong)(yong)去(qu)離子水洗至無(wu)醇味(wei)→5%HCl溶液(ye)浸泡(pao)2～4h→用(yong)(yong)(yong)(yong)去(qu)離子水洗至流(liu)出(chu)液(ye)為中(zhong)性→2%NaOH溶液(ye)浸泡(pao)2～4h→去(qu)離子水洗至流(liu)出(chu)液(ye)為中(zhong)性，備用(yong)(yong)(yong)(yong)。
大孔吸(xi)附樹脂的靜態(tai)吸(xi)附和解吸(xi)試驗
將經(jing)預處理后(hou)(hou)的大孔吸(xi)(xi)(xi)附(fu)樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)(zhi)抽(chou)濾并吸(xi)(xi)(xi)干其(qi)表面水分，準確(que)稱取4種(zhong)預處理后(hou)(hou)的樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)(zhi)1g分別置于25mL具(ju)塞錐(zhui)形瓶中，各加(jia)入(ru)(ru)10mL(質量(liang)濃度為(wei)5.02mg/mL)花(hua)(hua)生紅衣原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)素粗提液(ye)，搖(yao)勻，放入(ru)(ru)氣浴(yu)恒溫(wen)振蕩器(qi)中，振蕩速(su)率為(wei)120r/min，溫(wen)度為(wei)30℃。在0.5、1、2、3、4、5、6、12、18、24h時吸(xi)(xi)(xi)取上清液(ye)，測定上清液(ye)中原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)素的含量(liang)，并以吸(xi)(xi)(xi)附(fu)量(liang)對時間(jian)作(zuo)圖(tu)，得到各樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)(zhi)的吸(xi)(xi)(xi)附(fu)動(dong)力學(xue)曲線。過濾吸(xi)(xi)(xi)附(fu)飽和的樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)(zhi)，分別加(jia)入(ru)(ru)20mL95%乙醇，在氣浴(yu)恒溫(wen)振蕩器(qi)中振蕩24h，過濾解(jie)吸(xi)(xi)(xi)液(ye)，測定其(qi)中原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)(qing)素含量(liang)。按下式計算吸(xi)(xi)(xi)附(fu)率、吸(xi)(xi)(xi)附(fu)量(liang)和解(jie)吸(xi)(xi)(xi)率。
(1)吸附率=(C0-C1)/C0×100%
(2)吸附量=(C0-C1)×V1/m
(3)解(jie)吸(xi)率=C2×V2/(C0-C1)×V1×100%
式中：C0為花(hua)(hua)生紅衣原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)素(su)粗提液質量(liang)濃(nong)度(du)，mg/mL;C1為經樹(shu)(shu)脂吸附后上(shang)清液中原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)素(su)質量(liang)濃(nong)度(du)，mg/mL;C2為原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)素(su)解(jie)吸液質量(liang)濃(nong)度(du)，mg/mL;V1為經樹(shu)(shu)脂吸附后上(shang)清液體積，mL;V2為原(yuan)花(hua)(hua)青(qing)素(su)解(jie)吸液體積，mL;m為干樹(shu)(shu)脂質量(liang)，g。
大孔樹脂AB-8純(chun)化花(hua)生(sheng)紅衣(yi)原花(hua)青素
稱取(qu)已(yi)處理的(de)(de)(de)AB-8大孔吸附樹脂裝填入層析(xi)柱，將(jiang)一(yi)定質(zhi)量濃度(du)(du)的(de)(de)(de)花生紅衣原花青(qing)(qing)素(su)粗提液(以澄(cheng)清為好)上(shang)柱，柱溫為室(shi)溫;洗脫(tuo)時首先用(yong)4BV蒸餾水洗去相對分子質(zhi)量較大的(de)(de)(de)蛋白質(zhi)、多(duo)糖等雜質(zhi);然后用(yong)4BV不同體積分數的(de)(de)(de)乙(yi)醇溶液將(jiang)吸附在樹脂上(shang)的(de)(de)(de)原花青(qing)(qing)素(su)梯(ti)度(du)(du)洗脫(tuo)下來，分批收(shou)集流出液，旋轉(zhuan)蒸發(fa)至(zhi)干，得到原花青(qing)(qing)素(su)純化物(wu)。接下式計算產(chan)物(wu)原花青(qing)(qing)素(su)的(de)(de)(de)純度(du)(du)和回(hui)收(shou)率。
(4)純(chun)(chun)度=純(chun)(chun)化物中原花青素質(zhi)量(liang)/純(chun)(chun)化物質(zhi)量(liang)×100%
(5)回收率=洗脫液(ye)體積(ji)×洗脫液(ye)中原花(hua)青素質(zhi)(zhi)量濃度(du)/(上樣(yang)液(ye)體積(ji)×上樣(yang)液(ye)中原花(hua)青素質(zhi)(zhi)量濃度(du))×100%
原花青素的測定
原花青素(su)標(biao)準曲線(xian)的繪制
準確(que)稱取(qu)0.0500g原花(hua)青(qing)素標(biao)準品，加甲(jia)醇溶解并定容至25mL，得到2.0mg/mL的(de)原花(hua)青(qing)素標(biao)準溶液(ye)(ye)(現配(pei))。分別精確(que)量取(qu)0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0mL原花(hua)青(qing)素標(biao)準溶液(ye)(ye)于10mL棕色容量瓶中，用甲(jia)醇稀(xi)釋(shi)至刻度線，此時得到質量濃度分別為0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mg/mL的(de)工(gong)作溶液(ye)(ye)。再各取(qu)1mL工(gong)作溶液(ye)(ye)于10mL試管中，分別加入6mL0.04g/mL香草醛甲(jia)醇溶液(ye)(ye)，3mL濃鹽酸，搖勻，在(zai)(30±1)℃下(xia)恒溫水浴(yu)保持20min，取(qu)出，在(zai)500nm波長下(xia)測定其吸光(guang)度，繪制標(biao)準曲線。回歸方程為Y=1.3306X+0.0664，R2=0.9966。
花(hua)生紅衣(yi)原花(hua)青素的測定
取(qu)1mL稀釋了一定(ding)倍數的(de)花生紅衣原(yuan)花青(qing)素(su)粗提液(ye)，分別加(jia)入6mL0.04g/mL香草醛甲醇(chun)溶(rong)液(ye)，3mL濃鹽(yan)酸，搖勻，在(30±1)℃下恒溫(wen)水浴保持(chi)20min，取(qu)出，在500nm波長(chang)下測定(ding)其吸(xi)光度，由標準曲線回(hui)歸方程可計算(suan)樣品中(zhong)原(yuan)花青(qing)素(su)的(de)質量濃度。
1.2.4HPLC-MS測定(ding)花(hua)生紅衣原花(hua)青素
將(jiang)洗(xi)脫級分10mg分別(bie)溶于10mL色(se)譜純甲醇中，經0.45μm濾(lv)膜(mo)過濾(lv)后進(jin)行(xing)HPLC-MS分析。
色(se)譜條件：色(se)譜柱為(wei)(wei)CSH柱(2.1mm×100mm，粒徑1.9μm);流(liu)動相A為(wei)(wei)乙腈，流(liu)動相B為(wei)(wei)0.1%甲酸水溶液;柱溫45℃;進樣(yang)量1μL;流(liu)動相洗(xi)脫條件為(wei)(wei)0~0.1min，5%A;0.1~30min，5%~20%A;30~32min，20%~80%A;32~32.5min，80%~5%A;32.5~35min，5%A。
質譜條件(jian)：ESI電離(li)源(yuan)(yuan)，負離(li)子模式;毛細管電壓(ya)(ya)3.0kV，錐孔電壓(ya)(ya)40.0V;離(li)子源(yuan)(yuan)溫度(du)100℃，脫溶(rong)劑(ji)溫度(du)400℃;錐孔氣(qi)流(liu)速(su)50.0L/h，脫溶(rong)劑(ji)氣(qi)流(liu)速(su)700.0L/h;碰撞電壓(ya)(ya)6V;相對分(fen)子質量(liang)掃(sao)描(miao)范(fan)圍(wei)(m/z)50~2000。
2結果與討論
2.14種大孔吸附樹脂對花(hua)生紅(hong)衣(yi)原花(hua)青素的靜態吸附率(lv)和解吸率(lv)
大孔(kong)吸(xi)附樹(shu)脂(zhi)是吸(xi)附性(xing)(xing)(xing)和(he)分子篩原(yuan)理相結合的分離介(jie)質，其吸(xi)附力(li)與吸(xi)附樹(shu)脂(zhi)和(he)吸(xi)附質之間的范德華(hua)力(li)和(he)氫鍵作用有關。本試驗(yan)所(suo)用大孔(kong)吸(xi)附樹(shu)脂(zhi)包括(kuo)極(ji)性(xing)(xing)(xing)樹(shu)脂(zhi)(NKA-9)、中極(ji)性(xing)(xing)(xing)樹(shu)脂(zhi)(HPD750)、弱極(ji)性(xing)(xing)(xing)樹(shu)脂(zhi)(AB-8)和(he)非極(ji)性(xing)(xing)(xing)樹(shu)脂(zhi)(D101)：
NKA-9和AB-8大孔吸附樹脂對原花青素均有較大的吸附率，D101大孔吸附樹脂的吸附率低于其他大孔吸附樹脂。原花青素分子中含有多個酚羥基，可形成氫鍵，具有一定的親水性和極性，容易被極性、中極性和弱極性樹脂吸附。除此之外，大孔吸附樹脂的吸附能力還與其孔隙結構、比表面積等有關。HPD750比表面積大，孔徑小，不利于原花青素分子通過樹脂的孔徑擴散到其內表面而被吸附。NKA-9表面極性大，對原花青素分子產生強烈吸附，會阻礙原花青素的解吸。大孔吸附樹脂的靜態動力學曲線一般可以分為兩種類型：第1種是快速平衡型，其特征是在吸附的起始階段吸附量迅速增加，很快達到吸附平衡;第2種是慢速平衡型，起始階段吸附量較小，吸附量的上升速度緩慢，吸附平衡時間較長。AB-8、NKA-9、D101樹脂對原花青素的吸附屬于快速平衡型，而HPD750則屬于慢速平衡型。因此，綜合考慮樹脂吸附量、解吸率以及靜態吸附動力學特征發現，AB-8大孔樹脂吸附量大、解吸容易并可以較快達到吸附平衡，故選用AB-8大孔吸附樹脂作為分離純化花生紅衣原花青素的吸附材料。
上(shang)樣流速對(dui)AB-8大孔(kong)吸附樹脂吸附原(yuan)花青素的影(ying)響(xiang)
上樣流(liu)速(su)小，樣液(ye)中溶(rong)(rong)質與(yu)樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)接觸時間長，其(qi)吸附較為完(wan)全;流(liu)速(su)過大(da)，溶(rong)(rong)質分(fen)子來(lai)不及擴散到樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)的(de)內表(biao)面(mian)進行吸附，導致吸附不充(chong)分(fen)，且浪費了樣品。因(yin)此，本試驗(yan)研究上樣流(liu)速(su)對AB-8大(da)孔吸附樹(shu)(shu)脂(zhi)(zhi)吸附原花青素(su)的(de)影響：
上樣流速為0.25mL/min和0.5mL/min時，大孔樹脂對原花青素的吸附率比較高，泄漏時間分別出現在250min和180min。當上樣流速為0.75mL/min和1.0mL/min時，泄漏時間出現較早，吸附過程不完全。考慮到實際的生產情況，選取0.5mL/min上樣流速較為合適。
洗(xi)脫流(liu)速對原花青素洗(xi)脫效果的影響
為(wei)了(le)使洗(xi)脫(tuo)液與AB-8大孔吸(xi)附(fu)樹(shu)脂(zhi)所吸(xi)附(fu)的溶(rong)質有(you)充分的接(jie)觸(chu)時間，進行有(you)效(xiao)地解吸(xi)，必(bi)須使洗(xi)脫(tuo)液以合(he)適的流速進行洗(xi)脫(tuo)，因此考察了(le)洗(xi)脫(tuo)流速對原(yuan)花青素洗(xi)脫(tuo)效(xiao)果的影響(xiang)：
洗脫流速為0.5mL/min和1.0mL/min時，洗脫效果相差不大，而當洗脫流速達到2.0mL/min以上時，洗脫效果明顯變差，原花青素純度也呈下降趨勢。因此，選擇洗脫流速為1.0mL/min，此時原花青素的解吸率為89.31%，純度為98.7%。
不同(tong)體積(ji)分數乙醇(chun)對原(yuan)花青素的洗脫效果(guo)
大孔吸附樹脂進行(xing)分離純化時常(chang)用的洗脫劑(ji)為乙(yi)醇溶(rong)液(ye)，不(bu)(bu)同體積分數(shu)乙(yi)醇溶(rong)液(ye)的極(ji)性不(bu)(bu)同，其對(dui)原花(hua)青(qing)素的洗脫能力也有所差異(yi)，因(yin)此本(ben)試驗研究(jiu)了不(bu)(bu)同體積分數(shu)乙(yi)醇溶(rong)液(ye)對(dui)原花(hua)青(qing)素的洗脫效果的影響(xiang)：
乙(yi)(yi)醇體積(ji)分數對(dui)(dui)花(hua)生紅衣原花(hua)青(qing)(qing)素的(de)(de)洗(xi)脫(tuo)曲線(xian)有(you)很(hen)大的(de)(de)影響，其中40%乙(yi)(yi)醇溶(rong)液(ye)(ye)的(de)(de)洗(xi)脫(tuo)曲線(xian)峰(feng)值最高，在0.8～2.5BV范(fan)圍(wei)內收集到的(de)(de)原花(hua)青(qing)(qing)素質量濃度相(xiang)對(dui)(dui)較(jiao)高。20%乙(yi)(yi)醇溶(rong)液(ye)(ye)對(dui)(dui)原花(hua)青(qing)(qing)素的(de)(de)洗(xi)脫(tuo)效果(guo)較(jiao)好(hao)，洗(xi)脫(tuo)曲線(xian)有(you)明顯的(de)(de)峰(feng)值，稍(shao)有(you)拖尾(wei)現象(xiang)。10%和95%乙(yi)(yi)醇溶(rong)液(ye)(ye)對(dui)(dui)原花(hua)青(qing)(qing)素洗(xi)脫(tuo)能力差，洗(xi)脫(tuo)曲線(xian)無明顯峰(feng)值。因(yin)此，可(ke)以通過收集不同范(fan)圍(wei)內的(de)(de)洗(xi)脫(tuo)液(ye)(ye)來制備不同純度的(de)(de)原花(hua)青(qing)(qing)素。
洗脫方式或收集方式對原花青素解吸效果的影響
原(yuan)花(hua)青素是由不(bu)(bu)同(tong)聚(ju)合(he)(he)度(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)兒茶(cha)(cha)素或(huo)表(biao)兒茶(cha)(cha)素組成(cheng)的(de)(de)(de)混合(he)(he)物，含有大量的(de)(de)(de)酚羥基，樹脂(zhi)吸(xi)附過(guo)程(cheng)中(zhong)極(ji)有可能發生氫鍵吸(xi)附，則不(bu)(bu)同(tong)聚(ju)合(he)(he)度(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)原(yuan)花(hua)青素被吸(xi)附和解吸(xi)的(de)(de)(de)過(guo)程(cheng)和速度(du)(du)(du)(du)必(bi)然存在差異(yi)。因此，梯(ti)度(du)(du)(du)(du)洗(xi)脫極(ji)有可能獲得聚(ju)合(he)(he)度(du)(du)(du)(du)不(bu)(bu)同(tong)或(huo)純(chun)度(du)(du)(du)(du)不(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)(de)原(yuan)花(hua)青素。列出不(bu)(bu)同(tong)體積分數(shu)乙醇洗(xi)脫收(shou)集到(dao)4種原(yuan)花(hua)青素的(de)(de)(de)解吸(xi)效果：
采用20%乙醇溶液進行洗脫得到的原花青素的純度最高，采用40%乙醇溶液進行洗脫，原花青素的回收率******。因此，選擇20%和40%乙醇作為制備原花青素的洗脫劑。
另將20%和40%乙(yi)醇(chun)的洗(xi)脫液分別收集(ji)：
20%乙醇洗脫解吸得到的干重從多到少，純度從低到高再到低，在約2～3.5BV收集到的洗脫液中原花青素純度最高，占總干重的23.4%;40%乙醇洗脫解吸得到的干重從多到少，純度從高到低，在約0~2BV收集到的洗脫液中原花青素純度最高，占總干重的84.2%。
在(zai)工業生產中可根據產品要(yao)求(qiu)選擇(ze)不同的(de)洗(xi)脫方式或收集(ji)(ji)方式。當(dang)用(yong)20%乙醇(chun)進行洗(xi)脫時(shi)，收集(ji)(ji)2~3.5BV洗(xi)脫液(ye)可得到(dao)純(chun)度大于(yu)98%的(de)原花青(qing)素，收集(ji)(ji)0~4BV洗(xi)脫液(ye)時(shi)可得到(dao)純(chun)度大于(yu)95%的(de)原花青(qing)素;當(dang)用(yong)40%乙醇(chun)洗(xi)脫時(shi)，收集(ji)(ji)0~2BV洗(xi)脫液(ye)可得到(dao)純(chun)度85%~90%的(de)原花青(qing)素，收集(ji)(ji)0~4BV洗(xi)脫液(ye)可得到(dao)純(chun)度約為80%的(de)原花青(qing)素。
6HPLC-MS對花生紅衣原花青(qing)素純化物(wu)的(de)分析結果
經AB-8大孔吸附樹脂分(fen)(fen)離得到的(de)(de)純化物(wu)均為低(di)聚體(ti)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)，20%乙醇純化物(wu)的(de)(de)主要(yao)成(cheng)分(fen)(fen)為A型原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)二聚體(ti)和A型原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)三聚體(ti)，40%乙醇純化物(wu)的(de)(de)主要(yao)成(cheng)分(fen)(fen)為A型原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)二聚體(ti)和A型原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)四聚體(ti)。研究發現(xian)只有低(di)相對分(fen)(fen)子質(zhi)量低(di)聚體(ti)(聚合度≤3)可以完全被(bei)胃(wei)腸道(dao)吸收(shou)。因此(ci)，試驗(yan)所制(zhi)備的(de)(de)花(hua)生紅衣原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)花(hua)青(qing)(qing)素(su)因其相對分(fen)(fen)子質(zhi)量小，易于被(bei)人體(ti)吸收(shou)，在人體(ti)內(nei)可充(chong)分(fen)(fen)發揮(hui)其生理功能。
3結論
研究了AB-8大孔(kong)吸(xi)附(fu)樹脂(zhi)分離純(chun)(chun)化(hua)得到(dao)(dao)不(bu)同(tong)純(chun)(chun)度花生紅(hong)衣原花青(qing)素(su)(su)的制(zhi)備工(gong)藝。******分離純(chun)(chun)化(hua)條件為(wei)：上樣流速0.5mL/min，洗脫(tuo)流速1.0mL/min，洗脫(tuo)液20%和(he)40%乙(yi)醇(chun)溶(rong)液。解吸(xi)后得到(dao)(dao)20%乙(yi)醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)物和(he)40%乙(yi)醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)物，20%乙(yi)醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)物純(chun)(chun)度最(zui)高，可達(da)98.7%，回收(shou)(shou)率(lv)較低，為(wei)29.41%，40%乙(yi)醇(chun)純(chun)(chun)化(hua)物純(chun)(chun)度為(wei)86.2%，回收(shou)(shou)率(lv)較高，為(wei)5031%。通過不(bu)同(tong)的收(shou)(shou)集方(fang)(fang)式可得到(dao)(dao)不(bu)同(tong)純(chun)(chun)度的原花青(qing)素(su)(su)，因此在工(gong)業生產中可根據產品(pin)要求選(xuan)擇不(bu)同(tong)的洗脫(tuo)方(fang)(fang)式或收(shou)(shou)集方(fang)(fang)式。
由HPLC-MS分(fen)析可知，經AB-8大孔樹脂(zhi)分(fen)離得到(dao)的(de)純化物(wu)(wu)均為(wei)低聚(ju)(ju)體原(yuan)花(hua)青(qing)素(su)(su)，20%乙醇(chun)純化物(wu)(wu)的(de)主要成(cheng)分(fen)為(wei)A型(xing)原(yuan)花(hua)青(qing)素(su)(su)二(er)聚(ju)(ju)體和A型(xing)原(yuan)花(hua)青(qing)素(su)(su)三聚(ju)(ju)體，40%乙醇(chun)純化物(wu)(wu)的(de)主要成(cheng)分(fen)為(wei)A型(xing)原(yuan)花(hua)青(qing)素(su)(su)二(er)聚(ju)(ju)體和A型(xing)原(yuan)花(hua)青(qing)素(su)(su)四聚(ju)(ju)體。